miércoles, 18 de mayo de 2011

Transgénesis

Se han desarrollado diversos proyectos para la obtención de melón transgénico, uno de ellos es el proyecto realizado por Carlos Muñoz Schick y Humberto Prieto E. el cual  lleva por titulo Caracterización molecular de aislamientos locales del virus del mosaico de la sandía tipo II (WMV-II) y transformación genética de melón utilizando genes quiméricos. Este proyecto fue financiado por FONDECYT 19950017 en chile, el cual se desarrollo entre 1995 - 1998
El Virus del Mosaico de la Sandía Tipo II (WMV-II) es un Potyvirus que infecta diversas cucurbitáceas, entre ellas melón, afectando severamente su calidad y por ende limitando su mercado internacional. En Chile, este virus se encuentra distribuído en una amplia zona correspondiente al sector central y central-norte, zona donde además se concentra la principal producción de melón del país. Entre las estrategias más utilizadas para la obtención de variedades mejoradas en cuanto a la resistencia/tolerancia a patologías virales está la introducción de secuencias genómicas virales en la planta, explotando el fenómeno conocido como "Protección Conferida", el que se debe a dos mecanismos fundamentales: la "Protección Cruzada" y la "Protección Derivada del Patógeno.
Con el propósito de obtener variedades de melón mejoradas en cuanto a sus características de resistencia/tolerancia, se realizó la caracterización molecular del WMV-II presente en Chile y se clonó el gen correspondiente a la proteína de la cápside (CP), se expresó en un modelo bacteriano como péptido de fusión y finalmente se elaboraron las construcciones necesarias para la transformación de dos variedades de melón con este gen.


El estudio molecular mostró que el aislamiento chileno de WMV-II corresponde a una partícula de morfología flexo-filamentosa de aproximadamente 750 nm de largo, con dos proteínas cuantitativamente principales de 32 y 66 kDa. El análisis de la secuencia del gen de la CP de WMV-II mostró una alta similitud con otras cuatro secuencias reportadas anteriormente. Esta secuencia se expresó en E. coli HB101 como proteína de fusión y además se manipuló considerando los requerimientos para su posible expresión en melón, utilizando construcciones binarias. Estas construciones se utilizaron para transformar las variedades de melón "Honey Dew "y "Jumbo Hales Best" utilizando A. tumefaciens y biobalística. Se logró la producción de 16 plantas transgénicas, evaluadas para la presencia del gen de la CP mediante PCR. Se ha logrado hasta el momento la aclimatación y salida a invernadero de 2 clones transgénicos, con un total de 20 plantas, que se evaluaron en un ensayo biológico de dasafío para infección por WMV-II. Los resultados mostraron que se obtuvo plantas resistentes, tolerantes en distinto grado y sensibles a la infección. Tanto las plantas transgénicas sensibles como los controles silvestres, tras un mes y medio de infección presentaron serios problemas de sobrevivencia, en comparación con aquellas resistentes y tolerantes con fenotipo de recuperación, que lucieron saludables tras este período de infección. A la fecha, los clones transgénicos generados se encuentran en etapa de producción de semillas en invernaderos de bioseguridad para el análisis de la segregación y estabilidad del transgén.

En la actualidad, algunos de estos clones transgénicos se han multiplicado y evaluado en condiciones de invernadero bajo la supervisión y autorización del CALT (Comité Asesor de Liberación de Transgénicos, del Servicio Agrícola y Ganadero).

 Referencias:

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